Imunohistochemie (IHC)

I    Protilátky

Společnost Biocare Medical nabízí ASR, RUO i IVD certifikované protilátky pro široké spektrum tkání zasažených rakovinou. Rakovina prsu je nejčastěji diagnostikovaná rakovina v USA, přičemž 14 % nových případů rakoviny přispívá k 6,9 % úmrtí každý rok. Za posledních 10 let se výskyt stabilizoval, zatímco úmrtnost klesla o 1,9 % ročně. Společnost Biocare Medical nabízí klíčové protilátky k identifikaci rakoviny prsu na FFPE tkáních a mnohé další.

Aktuální nabídku protilátek najdete na stránkách výrobce.

 

II    Automatizace laboratoře
Společnost Biocare Medical nabízí řadu produktů k automatizaci a urychlení zpracování vzorků.

1. ONCORE
2. IntelliPATH FLX
3. Decloaking Chamber NxGen

 

Více informací naleznete zde.

 

III    Detekce

1) PromARK – detekce zvířecích tkání (mikro-polymer)

Detekce pomocí systému mikro-polymer je určena speciálně pro použití na zvířecích tkáních. Tato technologie poskytuje vyšší citlivost a minimální křížovou reakci na endogenní myší a potkaní IgG. Produktová řada PromARK má speciálně vyvinuté blokátory a jedno, nebo dvou krokové detekční činidla.

• Vysoká specifita a citlivost barvení
• Minimální křížová reakce na endogenní IgG s proprietárními blokujícími reagenciemi
• Eliminace endogenního biotinu
• Snížení počtu IHC kroků
• Použití na vzorcích fixované formalinem, tkáních zalitých parafinem, volných a
       zmražených řezech a buněčných kulturách
• Velmi účinné pomocné reagencie
• Vhodné pro manuální i automatickou detekci

Živočišné tkáně obsahují endogenní imunoglobuliny, které při použití standardního systému detekce tvoří výrazné pozadí při barvení. BioCare poskytuje detekci pomocí systému mikro-polymer, který lze využít pro primární protilátky z různých zdrojů (myš, potkan, králík, koza) na celé řadě tkání (myší, krysí, psí, kočičí, skotu, koní, prasat, ovcí), které mají za následek snížení pozadí při barvení a vyšší citlivost. 

 

a) Tkáně hlodavce

i.Primární protilátky MYŠ

ii.Primární protilátky POTKAN

iii.Primární protilátky KRÁLÍK

iv.Primární protilátky KOZA

v.Blokovací a HIER reagencie pro zvýšení specifity a odstranění pozadí

 

HLODAVEC (Rodent decloaker)

Tento antigenní vyvolávací pufr je speciálně vyvinut pro práci s PromARK detekčním systémem. Rodent decloaker a patentované blokovací reagencie pomohou snižovat myší a potkaní endogenní IgG na hlodavčí tkáni. To je zvláště užitečné pro mozkové tkáně. Pomáhá redukovat nespecifické pozadí při barvení a zpřístupňuje antigen. Ve srovnání s použitím citrátového pufru je možné při použití Rodent decloaker zdvojnásobit až ztrojnásobit titry protilátek.

 

Blok R pro hlodavce

Toto blokovací činidlo je určené pro použití výhradně s potkaní tkání. Využívá patentované blokátory ke snížení, nebo odstranění endogenní potkaní IgG. Které mají byt použity pro detekční systém: myš – potkan; králík – hlodavec; koza – mikro-polymer.

 

Blok M pro hlodavce

Toto blokovací činidlo je určené pro použití výhradně s myší tkání. Využívá patentované blokátory ke snížení, nebo odstranění endogenní myší IgG. Které mají byt použity pro detekční systém: myš – myš; potkan – myš; králík – hlodavec; koza – mikro-polymer.

 

XR faktor

Toto blokovací činidlo je účinný blokátor pro odstranění endogenní potkaní IgG na potkaních tkáních. Kombinace Blok R a XR faktoru umožňuje použití primárních kozích, králičích a myších protilátek na potkaních tkáních. XR faktor je vyvinut k použití s detekčním systémem pro myší, králíky, kozy, nebo s mikro-polymer systémem pro kozu, neměl by být použit pro mikro-polymer detekční systém pro potkana.

 

XM faktor

Toto blokovací činidlo je účinný blokátor pro odstranění endogenní myší IgG na myší tkáni. Kombinace Blok R a XM faktoru umožňuje použití primárních kozích, králičích a myších protilátek na myších tkáních. XM faktor je vyvinut k použití s detekčním systémem pro potkany, králíky, nebo s mikro-polymer systémem pro kozu, neměl by být použit pro mikro-polymer detekční systém pro myš.

 

b) Tkáně psů a koček

Detekční polymery jsou navrženy k použití na psích a kočičích tkáních. S pokročilou polymerní technologií a patentovaným silným blokátorem poskytují detekční polymery zvýšenou citlivost, snížení počtu IHC kroků (bez avidin/biotin, nebo Link/proby) a prakticky eliminují křížovou reakci na endogenní psí a kočiči IgG. Použití je možnév tkáních zalitých parafinem, volných či zmražených řezech. Dostupné je pro manuální i automatickou detekci.

 

c) Tkáně z farmy

IHC detekce prionových infekcí u zvířecích tkání

Priony, nebo více specifické plaky PrPres proteinu jsou původci přenosných spongiformních encefalopatií (TSE). Projevem prionové nákazy u ovcí je klusavka (Scrapie). Klusavka je fatální neurodegenerativní onemocnění, které může mít fatální dopad na hospodářskou a fyzickou životaschopnost stáda ovcí. U losa severoamerického, losa evropského a jelena TSE svědčí o onemocnění chronického chřadnutí (CWD). Je-li u nemocného, nebo zemřelého zvířete podezření na TSE, používá se pro ověření nemoci detekce prionu pomocí IHC. Prion IHC Assay je součástí komplexu pro detekci Scrapie a CWD.

Hlavní komponenty kitu:

• Systém Decloaking Chamber 2002, nebo 2008
• Diva Decloaker
• Prion IHC Assay (2 části: Kit A a Kit B)
• intelliPath FLX systém

Též je k dispozici upravená forma kitu Prion IHC Assay, který obsahuje blokátory, protilátky, reagencie k mikro-polymer detekci a Wrap Red chromogen. Test je plně automatizován. Všechny reagencie jsou v intelliPATH zkumavkách pro snadnější použití.

IHC detekce polymerů myš–farma, králík–farma přináší vysokou citlivost barvení a specifičnost pro tkáně skotu , koní, prasat, ovcí. Současně kombinuje univerzální a dvojité skvrny, což umožňuje použití více protilátek v unikátních barvách na jednom skle. 

 

d) Multiplex IHC

Myš a králík – dvojité barvení

Detekce pomocí tohoto polymeru byla speciálně navržena k použití na potkaní a myší tkáni. Postup s 5 kroky pro detekci více antigenů může být provedeno cca za 2 hodiny. Doba barvení se zkracuje z 4 - 6 hod na cca 2 hod tím, že eliminujete několik kroků: blokovací krok avidin-biotin, eluční krok a sekvenční barvící krok. Pokročilá mikro-polymer technologie umožňuje zjednodušení postupu, zvýšenou citlivost a eliminaci pozadí při barvení. Silné blokátory jako Blok M pro hlodavce, nebo Blok R pro hlodavce eliminují endogenní myší a potkaní IgG pozadí pro mnoho tkání včetně lymfy, sleziny, plic, ledvin a jater.

 

Psí a kočičí tkáně

• Univerzální (myš + králík) HRP roztoky- HRP-polymer pro myš-pes může být kombinován ve stejných objemech s HRP polymerem pro králík-pes. Tím lze připravit univerzální HRP polymer, který bude označovat jak myší, tak králičí protilátky s HRP.
• Myší protilátky (HRP) + králičí protilátky (AP) -HRP polymer pro myš-pes může být kombinován ve stejném objemu s AP polymerem  pro králík-pes. Tím lze připravit dvojitě barvící polymer, který označí myší protilátku s HRP a králičí protilátku s AP.
• Králičí protilátka (HRP) + myší protilátka (AP) - HRP polymer králík-pes může být kombinován ve stejném množství s AP polymerem myš-pes. Tím lze připravit dvojitě barvícípolymer, který označí králičí protilátku s HRP a myší protilátku s AP.

 

2) Chromogens – syté, zářivé barvy

Biocare Medical nabízí největší škálu IHC specifických permanentních chromogenů pro použití s dvěma nejčastěji používanými enzymy: křenovou peroxidázou (HRP) a alkalickou fosfatázou (AP). Chromogeny jsou chemické sloučeniny, používané v IHC barvení, které produkují konečný zbarvený produkt, který může být vizualizován pod mikroskopem. Chromogeny společnosti Biocare vytváří široké spektrum barev.

 

Chromogen pro HRP	Barva konečného produktu
Betazoid DAB (3. generace)	Hnědá
Cardassian DAB (2. generace)	Černě hnědá
DAB (1. generace)	Hnědá
Romulin AEC	Cihlově červená
Bajoran Purple	Fialová
Vina Green	Zelená
Deep Space Black	Černá
Chromogeny pro AP	Barva konečného produktu
Warp Red	Fuchsin červená
Vulcan Fast Red (VFR)	Fuchsin červená
Ferangi Blue	Královská modrá

 

3) MACH 4 – extrémní citlivost pro myši ve 2 krocích

Je vysoce citlivý univerzální detekční systém. Dokáže detekovat myší, nebo králičí protilátky. Je k dispozici v univerzálním formátu (anti-mouse a anti-rabbit), značené křenovou peroxidázou (HRP), nebo alkalickou fosfatázou (AP). Je ideální pro použití s roztoky protilátek připravených z koncentrátů, nebo z naředěných protilátek. Umožňuje významně vyšší ředění koncentrovaných protilátek ve srovnání s jinými systémy detekce na bázi polymeru.

• 10 - 20x citlivější než běžné polymerní systémy s dextranem
• 10 - 40x citlivější při barvení jádra
• Vhodné pro detekci specifické myší anti-biotin, nebo anti-digoxigenin protilátky při ISH
• Mikro-polymer umožňuje vyšší citlivost, lepší přístup k jádru a ředění protilátky
• Kompatibilní s jinými automatizovanými systémy
• Kompaktní struktura umožňuje 40 násobné ředění primárních protilátek.

 

4) MACH 3 – velmi specifická detekce

Jde o dvou krokový detekční systém bez biotinu, který poskytuje vynikající specifitu, senzitivitu a barvení jádra pro myší a králičí primární protilátky. MACH 3 Detection Kit je buď pro myší, nebo pro králičí primární protilátky, značené křenovou peroxidázou (HRP), nebo alkalickou fosfatázou (AP).

• Senzitivitu zvyšuje sekundární činidlo
• Zvýšená hustota enzymů na terciálním cíli
• 5 - 10x zvýšená citlivost barvení
• Lepší barvení jaderných cytoplazmatických/buněčných povrchových antigenů
• Eliminace pozadí
• Kompatibilní s jinými automatizovanými systémy
• Silné zbarvení i při vyšším naředění primárních protilátek

 

5) MACH 2 – jednokrokový protokol pro myši a králíky

Jde o jedno krokový detekční systém bez biotinu pro myší a králičí protilátky. Detekce se provádí pomocí jednoho činidla, které se přidává po primární protilátce. Lze ho použít pro ředěné i koncentrované protilátky. MACH 2 zvyšuje specifičnost barvení v porovnání s bežným dextran polymerem. Je k dispozici v anti-mouse, anti-rabbit a univerzal (anti-mouse a anti-rabbit) variantě, které jsou značené křenovou peroxidázou (HRP), nebo alkalickou fosfatázou (AP).

• 3 - 4x vyšší specifita při barvení jádra

 

6) MACH 1 – velmi efektivní detekce polymerů

Systém univerzální detekce polymerů nabízí nákladově efektivnější detekci pro IHC laboratoře. Ve srovnání s konvečním systémem ABC poskytuje vynikající barvení.

Jde o dvoustupňovou bez biotinovou technologii, která využívá specifické sondy pro detekci myší protilátky. Sonda se přidává po HRP polymeru, který se váže na sondu i králičí protilátku. Kroky s avidin-biotinem jsou eliminovány. Inovativní technologie s HRP polymerem poskytuje vynikající barvení na myších a králičích protilátkách.

• Nižší délka protokolu cca o 90 minut ve srovnání s ABC metodou
• Eliminuje endogenní nespecifické pozadí při barvení

 

7) 4-PLUS – nejlepší v detekci avidin-biotin

Detekční systémy 4-PLUS jsou určeny pro spolehlivé a nákladově efektivní dvoustupňové detekce, které poskytují vysokou úroveň citlivosti. Většina primárních protilátek se může ve srovnání s jinými komerčními systémy ředit dvojnásobně. Může být použit pro myší a králičí primární protilátky. Po označení antigenu primární protilátkou je druhově specifická, nebo univerzální, afinitně purifikovaná, biotinylovaná sekundární protilátka přidána k navázání. Poté se přidá křenová peroxidáza (HRP), nebo alkalická fosfatáza (AP) označená streptavidinem. Je přidán chromogen/substrát který reaguje s HRP, nebo AP za vzniku intenzivního barevného signálu.

Avidin-Biotin blokovací kity jsou optimalizovány pro blokování endogenního biotinu v tkáňových řezech. Endogenní biotin je bohatě obsažen v buňkách jako jsou hepatocyty, ledvinové kanálky a tumory. Biotin blokovací kity mohou eliminovatnespecifické falešně pozitivní barvenípoužitím avidin-biotin detekčních systémů. Blokovací krok je obzvláště kritický při použití tepelně indukovaného epitopu (HIER) který odkrývá endogenní biotin v tkáních. Používají se myší a králičí primární protilátky.

 

Pro více informací o produktech Biocare Medical prosím kontaktujte produktového manažera Jana Konečného (Česká republika) nebo Boženu Bollovou (Slovenská republika).

Související odkazy